Convertir-se amb la comuna Schizophyllum: crear una cultura estèril a partir de bolets trobats: 3 passos (amb imatges)

2024 Autora: John Day | [email protected]. Última modificació: 2024-01-30 08:15

Aquest instructiu es centra en explicar com crear un cultiu estèril del bolet Schizophyllum Commune (nom comú bolet Split Gill) en una placa de Petri amb bolets trobats. S'ha comprovat que la comuna Schizophyllum té més de 28.000 sexes, es pot trobar a tots els continents, excepte a l'Antàrtida, i té la capacitat (com altres "fongs de podridura blanca i marró") per degradar la contaminació endocrina que altera (plàstics, hormones que imiten la petroquímica industrial com el fertilitzant Atrazina, el plastificant Bisfenol-A o l’hormona sintètica Dietilstilbestrol).

Aniré repassant les tècniques d’identificació de bolets salvatges, com fer una placa de Petri amb agar nutrient i com utilitzar els bolets trobats per cultivar un cultiu aïllat estèril a la seva placa de Petri. Altres instruccions d’aquesta sèrie expliquen tècniques com la identificació genètica de bolets, assaigs enzimàtics simples per provar la capacitat del bolet per descompondre els plàstics i la contaminació que imita les hormones i com elaborar formatge amb S. Commune.

Aquest projecte va sortir del treball col·laboratiu de Mary Maggic, Paula Pin i jo mateixa durant una residència a HANGAR a Barcelona, Espanya, tardor de setembre de 2018. Per obtenir més informació sobre el projecte, llegiu a ~~ o ometeu tots els Bla Bla i aneu directament al pas 1 per al tutorial:)

Les imatges provenen dels fitxers Schizophyllum Commune Fanzine ~ es poden descarregar gratuïtament aquí

Durant la residència, els nostres tres objectius principals eren:

1 ~ Investigueu i digeriu la literatura científica sobre la comuna Schizophyllum i les seves diverses interaccions amb hormones i contaminants petroquímics pertorbadors endocrins. S. Commune és un dels molts fongs de "podridura blanca i marró" amb la capacitat de descompondre la contaminació hormonal i endocrina. Aquests fongs s’alimenten dels arbres excretant enzims "lignocel·lulòsics" dels seus cossos en xarxa o "micelis" i els enzims són capaços de trencar la cel·lulosa i la lignina que formen els arbres. A causa de les similituds estructurals entre la cel·lulosa, la lignina i les hormones EDS 'com l'atrazina, el BPA, l'estradiol, el dietilstilbestrol i els nonilfenols, els enzims "lignocel·lulòsics" secretats pels fongs també poden descompondre una àmplia varietat de tòxics. A més d’això, S. Commune produeix polisacàrids immunoestimulants que són útils com a tractaments i preventius del càncer (Aprovat al Japó per al tractament de càncers de coll uterí), poden millorar les propietats fitoestrogèniques de certes plantes mitjançant la fermentació, es poden utilitzar en lloc de quall i lactobacili a processos d'elaboració de formatges i produeixen enzims de dissolució del coàgul de trombina (útils en el tractament de la trombosi). Curiosament, aquests mateixos "beta-glucans" que es poden extreure amb aigua bullent com a tractaments contra el càncer i immunostimulants, també són utilitzats per la indústria del petroli per augmentar el rendiment del petroli, lligant S. Commune en un bucle de retroalimentació bizaar a la producció del trastorn endocrí. petroquímics és capaç de degradar-se i remeiar.

2 ~ Desenvolupeu protocols DIY i DIWO (feu-ho amb altres) que simplifiquin aquests recipients per treballar amb EDC i fongs per traduir coneixements científics codificats a un llenguatge més accessible. Utilitzeu aquests recipients per a l’educació, per qüestionar-los, per resistir-los a les colonitzacions moleculars i per crear noves narratives sobre els esdeveniments multiespècie i la nostra mutagènesi col·lectiva.

3 ~ Desafia el discurs queerfòbic cisheteronormatiu dominant que envolta els productes químics pertorbadors endocrins (EDC). Per citar la beca de Malin Ah-King i Eva Hayward sobre els temes, "Molts mitjans informatius informen d'aquests temibles relats endocrins dels nostres jardins. En un esforç per posar en primer pla aquests problemes -com descriurem a continuació-, els mitjans de comunicació han posat de manifest una metamorfosi de Frankenstein que amenaça el sexe i la sexualitat. En lloc d’abordar els molts altres riscos per a la salut associats a l’exposició tòxica, els problemes més sensacionals i polèmics defensen el debat i la resposta crítica. Sorgeix preguntes: Per què el sexe és més central que el càncer, les malalties autoimmunes, i fins i tot la mort? Quins nervis culturals (molts dels quals globalitzats) es desencadenen? I, per a les que tenim inquietuds feministes, com podem reorientar el debat fora de l’essencialisme, el sexisme i l’heteronormativitat? " (Sexes tòxics).

Schizophyllum Commune és un "fong de podridura blanca" únic, ja que s'ha trobat que té més de 28.000 sexes genètics. Aquesta adaptació, molts teoritzen, ha permès la increïble diversitat genètica d'aquesta espècie que existeix a tots els continents del món excepte a l'Antàrtida. Volíem celebrar la bella multiplicitat sexual d’aquest organisme com un exemple de la curiositat de la biologia. El discurs dominant que envolta els EDC als mitjans de comunicació, i fins i tot dels activistes ecologistes, es centra en narracions no científiques, segons les quals aquestes molècules provoquen certes sexualitats o gèneres que la nostra societat patologitza, etiqueta com a no normatives i que sovint busca eliminar o evitar. El focus fòbic estrany i pànic del sexe de les crides públiques sobre l’EDC és científicament poc realista (les hormones i els disruptors endocrins no fan que la gent sigui estranya ni trans), sinó que ignora tots els efectes devastadors i reals que podem relacionar amb els EDC: l’obesitat, trastorns de la tiroide, certs càncers, entre altres riscos per a la salut.

Pas 1: trobeu la comuna Schizophyllum que viu a la vostra comunitat

Els cultius estèrils de laboratori de Schizophyllum Commune es poden comprar per uns 350 dòlars a un banc de cultius microbiològics com ATCC … és per això que vam optar per cultivar gratuïtament bolets salvatges:)

Ho vaig tenir fàcil perquè havia estat llegint sobre Schizophyllum Commune i em vaig adonar que creixia un dia sobre un arbre davant del meu apartament. Si no teniu la sort d’ensopegar accidentalment amb S. Commune del vostre barri, voldreu anar a una zona boscosa a buscar bolets “de mènsula” que creixen en arbres de fusta malalta (arbres que semblen que no ho fan) massa bé) o arbres caiguts. S. Commune és un dels fongs més comuns existents a tot el món i es pot trobar bàsicament a qualsevol lloc on hi hagi fusta dura per cultivar.

Mushroomobserver.org proporciona una descripció detallada fantàstica d’on i quan és probable que trobeu S. Commune, així com de com identificar-lo i com evitar “semblants” que puguin conduir a una identificació errònia:

"IDENTIFICACIÓ: Schizophyllum commune s'identifica fàcilment per les branques dividides, els cabells densos i el casquet en forma de ventall. El barret té 1-4,5 cm d'ample i normalment té forma de closca o ventall amb una superfície de color grisós a blanquinós. Les basidiospores són de 5-7,5 × 2 -3 micròmetres. Un bolet similar conegut com a "Crimpada branquial" Plicaturopsis crispa no està tan àmpliament distribuït.

HÀBITAT: Schizophyllum commune creix sobre fusta dura utilitzant enzims per degradar la lignina i provoca "podridura blanca". Per tant, es troba a la majoria de les zones llenyoses. Es pot trobar tot l'any a causa de la seva capacitat per assecar-se, rehidratar-se en millors condicions i després continuar esporulant.

Aquest fong pot ser paràsit en arbres de petit diàmetre que es troben estressats per altres factors, com la sequera.

SEMBLA: La Plicaturopsis crispa o la "branca encrespada" és similar a la branca dividida. També té un cos fructífer en forma de closca / ventall. Tanmateix, el capell és de color marró vermellós o marró groc, i la part inferior és molt característica. Té una vena arrissada com a brànquies molt diferents de les brànquies dividides de la comuna Schizophyllum. La branquia arrugada és menys freqüent però distintiva quan es troba ".

Pas 2: feu plaques d’agar nutritives perquè S. Commune creixi

Per aïllar una cultura de la S. Commune, necessiteu algunes plaques de Petri farcides d'aliments per al bolet. L’agar amb extracte de malta és un aliment senzill per a S. Commune, o “mitjà nutritiu” que es pot fer amb ingredients de fàcil accés. També és una bona font d’aliment per utilitzar quan es fan experiments d’assaig enzimàtic amb S. Commune i altres fongs de podridura blanca o marró ~~ aquest procés es tractarà en un altre instructiu.

NOTA LATERAL: si heu tingut problemes per trobar S. Commune, hi ha molts altres fongs de la mateixa família que es poden cultivar mitjançant els mateixos processos i que són tan bons si no millor per degradar els contaminants que alteren el sistema endocrí. La cua de gall d’indi (Trametes Versicolor) s’ha trobat en molts estudis que van considerar que centenars de fongs de podridura blanca i marró eren els màxims productors d’enzims "lignocel·lulòsics" que degraden la contaminació petroquímica. Els bolets d’ostra també hi són molt bons.

Faig la meva feina microbiològica en un laboratori comunitari de biologia anomenat BUGSS (Baltimore Underground Science Space) on tinc accés a articles de vidre, bàscules digitals, cilindres graduats, un autoclau (per a l’esterilització de calor i pressió dels mitjans de comunicació), etc. va sorgir arreu del món durant l'última dècada, de manera que és possible que vulgueu consultar aquesta llista per veure si n'hi ha cap a prop vostre. Si no teniu un gran laboratori comunitari com aquest a la vostra zona, haureu d'invertir en alguns equips bàsics per a aquest procés, com ara:

1 ~ Una balança digital per mesurar els ingredients amb precisió

2 ~ Una olla a pressió per esterilitzar els suports amb calor i vapor

3 ~ Plats Petri, es poden comprar en línia bastant econòmicament, el vidre reutilitzable o el plàstic d'un sol ús funcionaran, però sempre és millor reutilitzar:)

4 ~ Alguns articles de vidre per barrejar els ingredients, esterilitzar-los i emmagatzemar-los.

Si no voleu invertir en aquest equip, podeu trobar plaques d’agar d’extracte de malt pre-abocat per comprar a llocs web com Amazon ~, a la llarga, serà més car si teniu previst continuar fent tasques microbiològiques.

Ja hi ha moltes guies fantàstiques i vídeos de youtube sobre com fer els vostres propis plats Petri de nutrients. Així que, en lloc d’explicar-ho molt detalladament, només vincularé a un parell i us proporcionaré la recepta d’un 2% d’agar d’extracte de malt, que és el mitjà nutritiu que faràs servir.

Freshcap Musrooms: Guia sobre com fer plaques d’agar per cultivar bolets a casa

Mykoweb: Introducció al cultiu de bolets

Fitxa tècnica d’agar d’extracte de malt

2% Agar d'extracte de malt (MEA) ~~ Recepta d'1 litre:

20g d’extracte de malta (subministrament habitual de cervesa, es pot comprar en línia)

Agar de 15 g (agent solidificador: s'utilitza per cuinar sovint perquè es pugui comprar en línia o en algunes botigues de queviures)

1 litre H20 (normalment faig servir aigua d'osmosi inversa que es pot comprar a la majoria de botigues de queviures en gerres de galó)

Aquesta recepta es pot modificar fàcilment si voleu obtenir quantitats més petites. Sovint, per exemple, només faig 250 ml alhora, de manera que només acabo fent servir 5 grams d’extracte de malta, 3,75 grams d’agar i 250 ml d’aigua.

Pas 3: inoculeu el vostre plat Petri amb fongs

El bolet que veieu es diu "cos fructífer", és només una petita part de l'organisme. La majoria del seu cos s’amaga a l’arbre (o a terra), consumint la fusta. Aquesta part del bolet s’anomena miceli. Per cultivar el cos filamentós, tentacular, rizomàtic i micelial blanc de Schizophyllum Commune a una placa de Petri, agafareu una mostra de la tija, esterilitzeu-la i la col·loqueu a les plaques MEA. El miceli creixerà a partir de la mostra del nucli de la tija del bolet esterilitzat i colonitzarà la placa de Petri, semblant una estora de cotó blanc.

Necessitareu:

• Les plaques d’agar d’extracte de malt (MEA) que heu preparat al pas anterior
• Alcohol isopropílic al 70% (alcohol fregant) i ampolla de polvorització
• Tovalloles de paper
• El bisturí, o simplement una navalla d’acer inoxidable, funcionarà
• pinces metàl·liques
• guants
• Una flama: faig servir una làmpada alcohaul per esterilitzar els instruments, NonDisjunction té un gran tutorial sobre com fer-ne un aquí.
• Superfície estèril per tallar (acabo d'utilitzar una placa de Petri estèril per a això)
• Parafilm, una pel·lícula de parafina que s’utilitza per segellar les plaques de Petri; també podeu utilitzar cinta adhesiva si no en teniu

TÈCNICA ESTÈRIL:

El més important que s’ha de tenir en compte a l’hora d’utilitzar tècniques estèrils és que els bacteris i les espores cauen contínuament a l’aire, de manera que voleu mantenir les plaques de Petri cobertes el màxim possible. Quan aixequeu les tapes per abocar el material o inoculeu-lo, sempre és millor mantenir la tapa just a sobre del plat, cosa que us permetrà accedir a l'interior horitzontalment, però mantenint la tapa sobre el plat per evitar la caiguda de bacteris. són un conglomerat gegant d’organismes humans, bacterians, fongs i altres ~~ tot i que no el veieu, esteu envoltats per un dens núvol de microbis que es difonen del cos. En lloc d’estar assegut a la superfície de la pell, el vostre micro-bioma s’estén a l’aire ~~ sooooooo, no agiteu mai les mans sobre la placa de Petri ni inclineu-vos sobre la placa oberta per mirar-hi. les tens;)

CONFigureU EL VOSTRE ESPAI DE TREBALL SEMESTÈRIL

Trieu una superfície de treball no porosa, lliure de deixalles i deixalles. Polvoritzeu la zona amb la vostra solució alcohòlica isopropílica al 70% i netegeu-la amb un paper absorbent. Col·loqueu la flama al centre de la vostra zona de treball i enceneu-la. Voleu treballar el més a prop possible de la flama perquè crea un petit camp estèril al seu voltant. Col·loqueu les plaques MEA a un costat i la mostra de bolets sobre una superfície de tall estèril a l’altre costat. Normalment faig servir una placa de Petri estèril com a superfície de tall estèril i també com a suport per a eines. Aboqueu una mica d’alcohol isopropílic en un got petit: l’utilitzarà per esterilitzar la fulla i les pinces mentre treballeu.

* ¡~ INOCULAR ~! *

Abans de fer res, esterilitzeu la fulla i les pinces submergint-les a l'alquil isopropílic i mantenint-les damunt la flama durant una mica. Després de l’esterilització, recolzeu-los a la superfície de tall estèril si els poseu a sota. Amb les pinces, manteniu quieta la tija del bolet i talleu-ne un tros al final. Agafeu aquest tros i talleu tots els costats per acabar amb un petit cub de nucli de la tija de bolet amb totes les superfícies exteriors eliminades. Això ajuda a eliminar tots els altres microbis que viuen al bolet perquè no contaminin la vostra cultura. A continuació, submergeu el nucli de la tija a l’isopropil durant uns 30 segons, traieu-lo i deixeu-lo assecar dins del camp estèril de la flama (no utilitzeu la flama per assecar-lo, això matarà el bolet). La flama esterilitza les pinces de nou mentre espereu que el nucli de la tija s’assequi. A continuació, simplement aixequeu la tapa d’una de les plaques MEA el suficient per lliscar les pinces cap al lateral i utilitzeu les pinces esterilitzades per col·locar el nucli de la tija al centre de la placa. Segelleu la placa amb parafilm i, durant les properes setmanes, hauríeu de veure miceli de S. Commune colonitzant la placa.

Normalment faig diverses plaques quan treballo amb mostres silvestres, de manera que, si tinc contaminació, és probable que tinc almenys un cultiu net.